CCK-8試劑盒,是用于測定細胞增殖或毒性實驗中活細胞數目的一種高靈敏度,無放射性的比色檢測法。
CCK法應用非常廣泛,如藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性測驗等。
操作步驟:
1、在96孔板中配置100μl的細胞懸液,將培養板在培養箱預培養24小時(在37℃,5%CO2的條件下)。
2、向培養板加入10μl不同濃度的待測物質。
3、將培養板在培養箱孵育一段適當的時間(例如6、12、24或48小時)。
4、向每孔加入10μlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數)。
5、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。
6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度,如無450nm濾光片,可以使用420-480nm的濾光片。
7、如暫時不測定OD值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10μl0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下,在24小時內吸光度不會發生變化。
注意: 如果待測物質有氧化性或還原性,可以加CCK之前更換新鮮培養基(除去培養基,并用培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養基),去掉影像。 當然影響比較小的情況下,可以不更換培養基,直接扣除培養基加入后的空白吸收即可。
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