ELISA實驗的分類

直接法（Direct ELISA）

原理：將抗原或抗體固定于酶標板上，然后用酶標抗體或抗原直接檢測。

直接法將抗原或抗體固定到酶標板上，用帶有酶標記的一級抗體或一級抗原，與之特異性結合，再利用酶催化底物顯色，即可測定總靶標蛋白的含量。

間接法（Indirect ELISA）

原理：將抗原或抗體固定于酶標板上，隨后分兩步進行檢測：首先加入檢測抗體或抗原進行特異性結合，隨后加入酶標二抗檢測并利用底物顯色。

間接法常用于檢測抗體。將抗原固定到酶標板上，加入一抗，與抗原特異性結合，再加入帶有酶標記的二抗，使二抗與一抗特異性結合，最后加入底物，使底物與酶反應顯色，即可測定總靶標蛋白的含量。

夾心法（Sandwich ELISA）

夾心法分為雙抗體夾心法和雙抗原夾心法。

雙抗體夾心法：此方法常用于檢測抗原。將抗體固定在固相載體上，加入待測抗原，與抗體特異性結合，再加入酶標抗體檢測，并利用底物顯色，即可測定總靶標蛋白的含量。

雙抗原夾心法：反應模式與雙抗體夾心法類似，用固相抗原和酶標特異性抗原，分別代替固相抗體和酶標特異性抗體，即可測定樣品中的抗體。

夾心法ELISA的顯色結果與待檢抗原（或抗體）的量成正比。

競爭法（Competitive ELISA）

原理：樣本中的抗原及預包被的酶標抗原，競爭性地與固相抗體相結合。樣本中的抗原含量越多，結合在固相上的酶標抗原就越少，最終顯色也越淺。需要注意的是，顯色結果與待檢抗原（或抗體）的量成反比。

預先將抗原包被在固相載體上，并加入酶標記的特異性抗體。實驗時，加入待檢抗原（或抗體），如果待檢物是抗原，則待檢抗原與預先包被在固相載體上的抗原競爭結合酶標抗體；如果待檢測物是抗體，則待檢抗體就與系統中原有的酶標抗體競爭結合包被在固相載體上的抗原。通過洗滌洗掉被競爭結合的酶標抗體，最后加底物顯色。

競爭法顯色結果與待檢抗原（或抗體）的量成反比，且適用于測定只有一個識別位點的小分子物質。

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