免疫共沉淀（CoIP）實(shí)驗原理及應(yīng)用

免疫共沉淀與免疫沉淀技術(shù)所使用的原理與方法大致相似，所不同的是，在免疫共沉淀中，對靶蛋白的結(jié)合與沉淀由另一個與之發(fā)生相互作用的蛋白替代。在免疫共沉淀或免疫沉淀的基礎(chǔ)上，通過進(jìn)一步與其它技術(shù)的結(jié)合，如聚丙烯酰胺凝膠電泳，還可進(jìn)一步對靶蛋白的的分子量等特性進(jìn)行鑒定。下面對此進(jìn)行詳細(xì)介紹。

實(shí)驗原理

(1)免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）：利用抗原抗體特異性反應(yīng)，對某個特定蛋白純化富集的方法，主要過程包括捕獲和固定。
(2)免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）：CoIP是在IP實(shí)驗的基礎(chǔ)上進(jìn)行的擴(kuò)展，主要用于蛋白之間的互作研究，常被用于鑒定特定蛋白復(fù)合物的中已知或未知的蛋白組分。其原理是基于抗體與抗原（靶蛋白）之間的特異性結(jié)合，此時如果樣品溶液中存在能與靶蛋白相互作用的目的蛋白，會一同被拉下來，隨后利用SDS-PAGE，Western Blot等方法對得到的目標(biāo)蛋白進(jìn)行分析，進(jìn)而證明兩者間的相互作用。

2、注意事項

＊確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白，單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、可大量生產(chǎn)、易標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，使用單克隆抗體有助于避免污染的發(fā)生；

＊要確保抗體的特異性，如果抗體不能和細(xì)胞溶解物中的抗原結(jié)合，則不會引起共沉淀反應(yīng);＊確定蛋白間的相互作用是發(fā)生在細(xì)胞中，而不是由于細(xì)胞的溶解才發(fā)生的。

3、實(shí)驗技巧為了確保最終得到的結(jié)果是天然狀態(tài)下的相互作用，而不是由于某些方面造成的人工相互作用（也就是“假陽性”），在Co-IP的實(shí)驗設(shè)計過程中，需要設(shè)置正確的對照。假設(shè)Co-IP實(shí)驗的實(shí)驗組為“磁珠+抗X抗體+靶蛋白X+目的蛋白Y”，則可能出現(xiàn)的“假陽性”及對應(yīng)需要設(shè)置的實(shí)驗對照如下表所示：