如何鋪出均勻的細(xì)胞培養(yǎng)板？

細(xì)胞居中和細(xì)胞邊緣化

從經(jīng)濟(jì)和高效的角度來說，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇不同規(guī)格的培養(yǎng)板。如在進(jìn)行藥物對(duì)待測細(xì)胞半抑制率（IC50）測試時(shí)，通常使用96孔板，一方面可以設(shè)置濃度梯度；另外還可一次性測多個(gè)藥物，減少實(shí)驗(yàn)誤差。

收集細(xì)胞要混勻

消化后的細(xì)胞一定要充分混勻，要把聚在一起的細(xì)胞團(tuán)充分地吹打開，最好是單個(gè)的狀態(tài)，但同時(shí)又不能損傷細(xì)胞，可以用玻璃吸管的移液器操作。離心也很有講究，一般用1000 rpm/min即可。離心力太大細(xì)胞容易抱團(tuán)，然后懸浮離心后的細(xì)胞團(tuán)時(shí)，先不要把所有液體都加進(jìn)，一般先加2mL液體，然后用1mL移液器輕輕將細(xì)胞吹起，細(xì)胞要像云霧一樣散開，這樣易于形成單細(xì)胞。

鋪6孔板，12孔板或24孔板，先在每個(gè)孔里面加1mL的培養(yǎng)基，晃動(dòng)使之鋪勻整個(gè)孔底，然后加入1 mL的細(xì)胞懸液。從孔的左邊靠近底部慢慢加入，這樣細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底，細(xì)胞分散較均勻，注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下。這里又有一個(gè)竅門，放在顯微鏡的載物臺(tái)上面。因?yàn)轱@微鏡的載物臺(tái)是水平校正過的，比什么桌面、超凈臺(tái)什么的要平多了。在載物臺(tái)上放置20-30分鐘，細(xì)胞不差這一會(huì)溫度和二氧化碳的，等細(xì)胞貼壁了，輕輕移入到孵箱中。

鋪96孔板，我每孔是加100微升細(xì)胞懸液，加完半邊板48孔后，將剩下的未加的細(xì)胞懸液再混一下，再繼續(xù)加剩余的半邊板子，都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度，敲三次即可，太大力或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆。