OCT冷凍切片包埋劑的制備步驟

冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進行切片的方法。 因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便，而多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。
制備步驟： 將組織在恒溫冷凍機里面切片。 冷凍腔內(nèi)的溫度一般設(shè)置為-18℃至-25℃，根據(jù)不同組織調(diào)節(jié)不同腔溫，平時應(yīng)將冷凍頭放置在冷凍臺上。 冷凍切片機應(yīng)長期處在冷凍恒溫狀態(tài)。
1、當(dāng)冰凍組織提取好之后，在冷凍頭上放少量的OCT或羧甲基纖維素（可用普通膠水代替），放上組織，速凍；
2、待組織凍結(jié)后，將冷凍頭裝刀切片機上；
3、粗切，修出切面細(xì)切幾張，用毛筆刷去刀上組織片；
4、放下抗卷板，開始切片，切片速度一般為5-6微米，切出的片子用載玻片貼附后立即放入甲醇冰醋/酸液（97ml甲醇+3ml冰醋/酸）中固定，固定時間為10-20秒。

注意事項：
1、速凍是冰凍切片的關(guān)鍵，因為只有速凍才能減少組織內(nèi)的冰晶，好的辦法就是將速凍頭迅速壓在組織上，切好后就可以凍片，特別適用于較脆的組織。
2、固定切片后應(yīng)立即放入甲醇冰醋/酸中固定，不能等切片干后再固定，后者容易造成細(xì)胞退變。 固定液有很多種，甲醇作用快、收縮小、染色較清晰，是冰凍切片最理想的固定液，而每97ml加入冰酸醋3ml，會減少某些膠質(zhì)、鈣質(zhì)較多的組織不容易掉片。
3、包埋劑可用普通膠水代替，但要加入適量的水（膠水與水的比例大約在2:1）。 太稀了容易損傷切片刀，太稠了黏在刀上不容易洗掉，影響切片的質(zhì)量。
4、冰凍用切片刀不僅要磨得快，而且要磨得直，否則切出來的片子就會不平整，不能進入抗卷板（最好使用一次性刀片）。
5、如組織發(fā)脆，可以等幾分鐘后再切，也可用手在組織上稍微加溫；如果用手去摸組織塊，最好戴手套，或用玻片間的紙夾在手與組織之間，以防感染。
6、冷凍室的室溫冬天一般設(shè)置在-19℃左右，夏天設(shè)置在-22℃左右。 不同的組織有不同的溫度要求，如肝臟、甲狀腺組織溫度應(yīng)設(shè)置在-15℃左右，脂肪組織一般設(shè)置在-35℃以下。
7、冷凍切片機應(yīng)長期處于恒溫冷凍狀態(tài)，經(jīng)常的開關(guān)電源容易造成設(shè)備損壞。

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