細胞常規培養是在細胞房中進行,在超凈工作臺或生物安全柜中,把細胞處理好,根據需要加入細胞培養基,放入細胞培養瓶/皿或細胞培養板中,再放到帶有5% CO2 的37℃恒溫培養箱中培養。細胞就像花花草草,尤其是細胞株基本每天都要觀察、打理的哦!
培養的細胞從哪里來?
1.細胞株
簡單說就是買的或送的。
2.原代細胞
組織或血液中提取的。一般細胞株可以連續傳代,而原代細胞養著養著就掛了。
培養細胞的生長方式有哪些?
1.貼壁生長
必須貼附于支持物表面才能生長。見于各種腫瘤細胞等。(你把培養皿或培養瓶底朝上,細胞也不會掉下來。
2.懸浮生長
于懸浮狀態下即可生長,不需要貼附于支持物表面。見于各種造血系統腫瘤細胞等。
細胞完全培養基的組成有哪些?
基礎培養基:80-95%
血清:5-20%
碳酸氫鈉:2.0g/L
青、鏈霉素:各200單位/毫升
細胞傳代
何為細胞傳代?
細胞在培養器皿中生長一定時間后,被分開接種到新的培養器皿即為細胞傳代。
為什么要傳代?
簡單說就是“孩子”長大了,要“分家”!
細胞株在培養過程中數量會不斷增多,但是培養細胞的細胞瓶/皿的空間有限,就會導致細胞之間接觸過于緊密,會使得細胞增殖收到抑制,所以我們必須把其中一部分細胞轉移到別的細胞瓶/皿,讓細胞有足夠的生長空間。
什么時候傳代?
觀察培養基是否正常,細胞狀態如何,細胞密度如何,決定是否傳代。如培養基變黃,細胞長成致密單層等情況。
傳代方法有哪些?
1.懸浮生長細胞傳代
1)離心法傳代:離心1000轉/分去上清,沉淀物加新培養液后再混勻傳代。
2)直接傳代法:懸浮細胞沉淀在瓶壁上,將上清培養液去除1/2~2/3,然后用吸管直接吹打形成細胞懸液再傳代。
2.半懸浮生長細胞傳代
此類細胞部分呈現貼壁生長現象,但是貼壁不牢,可用直接吹打使細胞從瓶壁上脫落下來,進行傳代。
3.貼壁生長細胞傳代
采用胰酶消化法傳代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。
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