小鼠腫瘤壞死因子α試劑盒的原理和操作步驟

本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中腫瘤壞死因子α(TNF-α)的含量。

試劑盒工作原理：
本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中小鼠腫瘤壞死因子α水平。向預先包被了小鼠腫瘤壞死因子α單克隆抗體的酶標孔中加入小鼠腫瘤壞死因子α，溫育；溫育后，加入生物素標記的抗小鼠腫瘤壞死因子α抗體。再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶，然后加入底物A、B，產生藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中小鼠腫瘤壞死因子α的濃度呈正相關。

實驗操作步驟：
1. 從室溫平衡30min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.加樣：1）空白孔，空白對照孔只加顯色劑A&B和終止液。其余各步操作相同；2）標準品孔：加入標準品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul；3）待測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul；
3.蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
4. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置30秒，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
5. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
6. 每孔加入終止液50μL，10min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
7.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。