細胞傳代實驗

所需材料：裝有75%醫(yī)用消毒酒精的酒精噴壺、PBS緩沖液、胰酶、含血清培養(yǎng)基、巴氏吸管、移液器、離心管、廢液缸，以及擁有基礎(chǔ)設(shè)施的細胞間。

操作步驟：

1.紫外照射滅菌后，我們應(yīng)該穿好滅菌服，戴好滅菌手套和口罩。

2.從培養(yǎng)箱取出細胞培養(yǎng)瓶（一般選擇處于對數(shù)期的細胞），用酒精噴壺在培養(yǎng)瓶表面噴灑75%酒精消毒，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶到超凈臺。

3.打開蓋子，輕輕吸出舊的培養(yǎng)液，用巴氏吸管加入適量PBS緩沖液洗滌1-2次（注意從側(cè)壁加入，以免沖掉細胞），棄去PBS緩沖液。

4.可用移液器加入1-2ml胰酶（具體量根據(jù)實驗需要確定，此處僅為參考用量），“十字”晃動，使胰酶充分接觸細胞。

5.將加入胰酶的細胞培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到倒置顯微鏡載物臺，鏡下觀察細胞消化情況，當(dāng)細胞變圓且大量脫落時，準(zhǔn)備終止消化，用75%的酒精噴灑培養(yǎng)瓶表面，轉(zhuǎn)移到超凈臺。

6.用移液器（或巴氏吸管）加入等量含血清培養(yǎng)基，終止消化。移液器（或巴氏吸管）充分吹打（動作也不要太猛，畢竟細胞也是蠻脆弱的），使細胞能夠完全脫落。

7.將培養(yǎng)瓶中混合液體轉(zhuǎn)移至離心管中（離心管規(guī)格根據(jù)實驗需要確定），配平，離心5分鐘左右（離心機轉(zhuǎn)速根據(jù)細胞種類而定，常見的有1000rpm/min）。

8.離心好后，用酒精噴壺噴灑離心管表面，轉(zhuǎn)移進超凈臺，打開蓋子，將上清液倒入廢液缸。

9.加入適量體積含血清培養(yǎng)基，用移液器或巴氏吸管輕輕吹打，制成細胞懸液。

10.將細胞懸液分裝進2個（或多個）潔凈滅菌培養(yǎng)瓶，加入適量培養(yǎng)基，蓋好蓋子將分裝好的培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡載物臺，觀察細胞情況，細胞應(yīng)保證一定數(shù)量，數(shù)量太少會影響生長情況。

11.在培養(yǎng)瓶上做標(biāo)記，注明傳代時間，細胞種類，操作人員等信息。在放入培養(yǎng)箱之前應(yīng)再次用酒精噴一噴培養(yǎng)瓶表面，然后應(yīng)記得整理操作臺，用75%酒精擦拭超凈臺臺面，清理廢液和垃圾。

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