脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的操作步驟

操作步驟：
(1) 細(xì)胞培養(yǎng)：取 6 孔培養(yǎng)板 (或用 35 mm 培養(yǎng)皿)，向每孔中加入 2 mL 含 1～2×105 個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃ CO2 培養(yǎng)至 40%～60% 匯合時(shí) (匯合過(guò)分，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞)。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在聚苯乙稀管中制備以下兩液 (為轉(zhuǎn)染每一個(gè)孔細(xì)胞所用的量)A 液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋 1-10 μg DNA，終量 100μL，B 液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋 2-50 μgLR，終量 100μL，輕輕混合 A、B 液，室溫中置 10-15 分鐘，稍后會(huì)出現(xiàn)微濁現(xiàn)象，但并不妨礙轉(zhuǎn)染 (如出現(xiàn)沉淀可能因 LR 或 DNA 濃度過(guò)高所致，應(yīng)酌情減量)。
(3) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用 2 mL 不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入 1 mL 不含血清培養(yǎng)液。
(4) 轉(zhuǎn)染：把 A/B 復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃ 溫箱置 6～24 小時(shí)，吸除無(wú)血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(5) 其余處理如觀察、篩選、檢測(cè)等與其它轉(zhuǎn)染法相同。
注意：轉(zhuǎn)染時(shí)切勿加血清，血清對(duì)轉(zhuǎn)染效率有很大影響。

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