IMDM液體培養基的應用

在表達狂犬抗體的CHO細胞無血清懸浮培養方法中的應用：

表達狂犬抗體的CHO細胞無血清懸浮培養方法，包括以下步驟：
1、細胞株的培養：所述細胞株為中國倉鼠卵巢細胞，且以下簡稱為細胞；
將細胞以2*105—6*105cells/ml的數量接種于血清培養基，培養條件為37℃，5%二氧化碳的培養箱，得到細胞A；
測定細胞A的生長曲線以及加入微量的促生長因子后得到細胞A的生長曲線；
所述促生長因子為促生長劑G-CSF-RCHP，且按0.2—0.4μl/ml添加至血清培養基。
2、細胞的收集：將生長于血清培養基中的細胞A使用胰酶處理1—5分鐘后，收集細胞A于15ml的離心管中，1000rpm離心3分鐘，吸入37℃預熱的10ml無血清培養基溶液洗滌細胞一次，最終定容于體積5ml的無血清培養基中得到細胞B，并采用Trypan Blue染色計數細胞B，測定細胞B的數量。
3、6孔板的預處理：取PH值為7.0—7.2的1XBS溶液，稀釋濃度為1mg/ml的纖維鏈接蛋白，得到最終工作濃度為20—80μl/ml的混合溶液，再吸取1ml混合溶液加入6孔板，處理時間為15—60分鐘，即得到預處理6孔板。
4、細胞培養：將細胞B按2x10的5次方—6x10的5次方cells/ml的數量接種預處理6孔板中，再將細胞B依次在含有5%、2.5%、1.25%、0.1%胎牛血清的IMDM液體培養基中逐漸代替培養，當細胞B充滿貼壁成長或經隔夜培養生長后即可替換為上述胎牛血清比例逐步減少的IMDM液體培養基，直至替換為無血清培養基；
同時通過顯微鏡觀察經過隔夜培養的細胞B的形態，并根據細胞B生長的情況，當細胞B由貼壁生長逐漸轉換為懸浮生長，且細胞形態由弧形或梭形轉換為圓形，將懸浮的細胞B轉接未經預處理的6孔板繼續培養，最終從生長的細胞B中篩選懸浮細胞，并對篩選出的懸浮細胞抗體進行檢測。